核酸分子雜交儀使用說明

進(jìn)口醫(yī)用全自動核酸分子雜交箱概念及原理

概念：核酸分子雜交是根據(jù)堿基互補(bǔ)原理，應(yīng)用已知序列的分子探針檢測待測單鏈核酸片段堿基序列的分子生物學(xué)技術(shù)，目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)生物化學(xué)病毒檢測疾病診斷基因工程等學(xué)科領(lǐng)域中原理：核酸的Walson-Crick堿基互補(bǔ)配對原則（即A=T,GC）核酸分子雜交儀。上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國UVP hb-1000分子雜交箱。

核酸分子雜交技術(shù)的分類
核酸分子雜交技術(shù)可按雜交環(huán)境分為固相雜交和液相雜交兩大類
1固相雜交

固相雜交即先將待測單鏈核酸樣品結(jié)合到支持物（常用有硝酸纖維素濾膜尼龍膜化學(xué)活化膜等）上，然后與溶液中的已知序列的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。固相雜交的特點(diǎn)：固相雜交后，未雜交的游離片段易除去，從而使膜上留下的雜交分子較易檢測，并可有效避免靶DNA自我復(fù)性故固相雜交技術(shù)zui為常用。
常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交斑點(diǎn)雜交狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交組織原位雜交和夾心雜交等。
2、液相雜交
液相雜交是指待測核酸和探針都存在于雜交液中，探針于待測核酸在液體環(huán)境中按照堿基互補(bǔ)配對形成雜交分子的過程液相雜交是研究zui早的雜交類型，但應(yīng)用的普遍程度較固相雜交為低。

液相雜交的特點(diǎn)：無需支持物待測核酸分子不用固定在支持物上其弊端是由于雜交后過量的未雜交探針存在于溶液中，在已有雜交結(jié)合物檢測水平條件下檢測誤差較高故液相雜交在過去較少應(yīng)用近年來由于雜交檢測技術(shù)的不斷進(jìn)步，商業(yè)檢測試劑盒的開發(fā)等液相雜交技術(shù)得到了迅速發(fā)展。

常用的液相雜交類型有：吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交復(fù)性速率液相分子雜交。
原位分子雜交實(shí)際上是固相雜交中的一種形式，雜交過程中待測DNA處于未經(jīng)抽提的染色體之上，并在原位置上被變性成單鏈，與探針進(jìn)行分子雜交。
原位分子雜交與其他雜交技術(shù)主要區(qū)別在于待測堿基序列位于染色體上其主要特點(diǎn)是可以準(zhǔn)確定位目的DNA在染色體上的位置因此在分子遺傳學(xué)研究癌基因定位遺傳性疾病臨床診斷方面具有重要而廣泛應(yīng)用。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的
保證核酸分子雜交儀的正確和正常使用。
2.范圍
美國進(jìn)口HB-1000核酸分子雜交儀的使用
3.職責(zé)
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部持有PCR上崗證的人員負(fù)責(zé)儀器的使用、維護(hù)。
4.工作流程
4.1 日常使用
4.1.1 本儀器適用溫度為0-40℃，適用濕度為≤90%。
4.1.2 液晶顯示界面
正常狀態(tài)顯示主界面，顯示內(nèi)容對應(yīng)實(shí)時溫度、轉(zhuǎn)速、定時倒計時時間和提示狀態(tài)等信息，當(dāng)進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)定時，則顯示參數(shù)設(shè)定界面。
4.1.3 面板界面及按鍵操作說明
a）“設(shè)定”鍵，按該鍵進(jìn)入“設(shè)定參數(shù)”界面，再通過按“△”或“▽”鍵選擇需要設(shè)定的“設(shè)定溫度”“旋轉(zhuǎn)速度”“定時時間”參數(shù)，當(dāng)光標(biāo)移動到對應(yīng)參數(shù)后，再按“設(shè)定”鍵，則進(jìn)入到對應(yīng)的參數(shù)設(shè)定，在參數(shù)設(shè)定時間完成后，按“設(shè)定”鍵，則保存相應(yīng)的設(shè)置。
b）“△”或“▽”鍵，用于調(diào)整參數(shù)設(shè)定項(xiàng)目或在參數(shù)設(shè)定時調(diào)節(jié)設(shè)定參數(shù)值的大小，每按一次上下移動一欄或數(shù)值增加較少1。
c）“?”鍵，用于參數(shù)設(shè)定時調(diào)節(jié)參數(shù)設(shè)定的某一位，自右向左循環(huán)，每按一次移動一位。
d）“返回”鍵，參數(shù)都設(shè)定完畢后，按一下“返回”鍵，返回到主界面。
e）“消音”鍵，當(dāng)有提示信號出現(xiàn)時，按“消音”鍵，聲提示消失，提示指示燈仍然保持，同時液晶屏顯示“消音”
f）“啟動”鍵和“停止”鍵，通過操作“啟動”、“停止”鍵，可控制轉(zhuǎn)架的運(yùn)行與停止，對應(yīng)運(yùn)行指示燈處于“亮”、“滅”狀態(tài)。
g）“復(fù)位”鍵，如需要重新計時或重新開展一批雜交實(shí)驗(yàn)時，可按“復(fù)位”鍵，則電機(jī)停止轉(zhuǎn)動，溫度保持設(shè)定溫度，定時時間恢復(fù)到初始設(shè)定狀態(tài)。

 4.1.4 使用方法
a）使用前準(zhǔn)備，打開箱門，取出轉(zhuǎn)架，將離心管或雜交瓶插入轉(zhuǎn)架中，應(yīng)均衡放置。
b）將裝好試樣的轉(zhuǎn)架安裝到儀器上，觀察轉(zhuǎn)架是否固定到位。
c）檢查無誤后，關(guān)上箱門，打開電源開關(guān)，電源指示燈亮，設(shè)定工作溫度、旋轉(zhuǎn)速度、定時時間等參數(shù)。（儀器具有設(shè)定參數(shù)記憶功能，下次實(shí)驗(yàn)如參數(shù)相同時，可不需修改參數(shù)）
d）按一下“運(yùn)行”按鈕，運(yùn)行指示燈亮，儀器即按照設(shè)定的參數(shù)運(yùn)行，箱體內(nèi)開始加溫，轉(zhuǎn)軸裝置按設(shè)定的速度旋，定時時間開始以0.1min為步長倒計時，定時時間到時，儀器發(fā)出聲音提示，并停止加熱和轉(zhuǎn)動。
e）實(shí)驗(yàn)過程中需停止轉(zhuǎn)動時，可按一下“停止”鍵，則轉(zhuǎn)架停止轉(zhuǎn)動，箱體保持恒溫，調(diào)整工作完成后，再按一下“運(yùn)行”鍵，轉(zhuǎn)架繼續(xù)轉(zhuǎn)動，定時器只有在電機(jī)正常旋轉(zhuǎn)時工作。
f）實(shí)驗(yàn)結(jié)束，按一下“停止”鍵，打開箱門，取出樣品。
g）如進(jìn)行下一組樣品的試驗(yàn)，按一下“復(fù)位”按鈕，初始化定時時間，重復(fù)上述操作。

4.2 儀器保養(yǎng)
在核酸分子雜交儀的使用過程中，請嚴(yán)格按照本操作規(guī)程規(guī)定的運(yùn)行環(huán)境和操作步驟使用，每次使用后需及時清理工作室，保持儀器外觀整潔，但需避免使用強(qiáng)酸、堿等腐蝕性清潔劑及有機(jī)溶劑清潔。

4.3 儀器的校準(zhǔn)
溫度檢測方法：用經(jīng)過驗(yàn)定合格，測量范圍為0-100℃的玻璃水銀溫度計。
4.3.1設(shè)定一個溫度控制值（高于室內(nèi)溫度5-80℃），調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速，運(yùn)行儀器30min，直到顯示的數(shù)值和設(shè)定的數(shù)值一致。
4.3.2透過門上的玻璃，觀察溫度計上顯示的刻度，獲得箱內(nèi)的準(zhǔn)確溫度。
4.3.3比較這兩個數(shù)值，如相差1℃以上，請于廠家聯(lián)系。
4.4 故障分析與處理
4.4.1打開電源開關(guān)，儀器電源指示燈不亮，應(yīng)首先檢查儀器電源連接是否良好，如連接良好，請切斷電源線，并用工具打開保險絲座，查看保險絲是否斷路，如保險絲故障，請及時更換保險絲。
4.4.2在通電狀態(tài)下，當(dāng)本設(shè)備不能正常工作時，請先觀察設(shè)定溫度設(shè)定是否超過環(huán)境溫度+5℃，如未超過請重新設(shè)置。
4.4.3如出現(xiàn)超溫提示，先待箱體溫度冷卻至設(shè)定溫度以下后，再重新觀察，如果仍然出現(xiàn)， 則一般為設(shè)備故障。
4.4.4如排除上述問題，儀器仍不能正常工作，請及時與廠家聯(lián)系維修。

美國UVP HB-1000核酸分子雜交儀操作注意事項(xiàng) 

分子雜交儀又稱分子雜交爐、分子雜交箱，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的需要可以選擇不同的規(guī)格型號。它是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室采用雜交技術(shù)的理想設(shè)備，可替代塑料雜交袋和水浴搖床，從而避免雜交袋破損帶來的污染危險。雜交爐具有微機(jī)控溫，爐內(nèi)空氣循環(huán)裝置設(shè)計獨(dú)特，升溫速度快等特點(diǎn)。

分子雜交儀由箱體、雜交瓶轉(zhuǎn)架或離心管轉(zhuǎn)架、雜交管、搖床、隔膜、電腦控制系統(tǒng)等部件組成，如圖所示。不同型號的箱體容納的管子數(shù)、微孔版數(shù)、載玻片數(shù)和平板數(shù)也不同。
核酸分子雜交技術(shù)根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，在一定條件下用標(biāo)記的已知DNA或RNA片段（探針）來檢測樣本中是否有待測的核酸序列 [1] 。
生理?xiàng)l件下DNA呈穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，在體外，當(dāng)有變性因素存在時(如溫度超過65℃、含胺或極端pH時)，DNA分子內(nèi)部的氫鍵斷裂，解離成兩條單鏈DNA，這種現(xiàn)象稱為變性。在除去變性因素后，單鏈DNA能通過堿基互補(bǔ)再結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，此過程稱為復(fù)性或退火。

在復(fù)性過程中，若存有與樣本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17～45個堿基)時，兩者可通過互補(bǔ)堿基形成雜交體，即雙鏈DNA分子，這一過程稱為雜交。用一段已知的DNA片段加入復(fù)性的DNA中，若能夠結(jié)合成雙鏈分子，說明樣本中含有已知的DNA序列。

核酸分子雜交不僅發(fā)生在DNA與DNA之間，也可發(fā)生在RNA與RNA、RNA與DNA之間。生成的雜交體分別為 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)

注意事項(xiàng):
1. 分子雜交儀需要安裝在有良好接觸的電源插座上。
2. 恒溫室處于高溫狀態(tài)下裝取雜交管時，注意不要燙傷。
3. 雜交管在裝入反應(yīng)液前一定要清洗干凈，裝入反應(yīng)液及反應(yīng)膜后一定要擰緊瓶蓋，以免漏液。
4. 在進(jìn)行同位素標(biāo)記的雜交實(shí)驗(yàn)時，必須檢查雜交管的密封情況，以免造成污染。一旦發(fā)生污染，請及時告知有關(guān)部門的使用人員和檢修人員，盡可能的減少不必要的傷害。
5. 由于分子雜交儀設(shè)計結(jié)構(gòu)緊湊，密封性要求高，所以在儀器運(yùn)行中出現(xiàn)故障需要檢修時，應(yīng)切斷電源由專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行。