用什么光源激發(fā)熒光蛋白?
LUYOR-3415RG熒光蛋白定位激發(fā)光源可與熒光蛋白觀察鏡luv-50A或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP)。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-50A共同使用,可在動物設(shè)備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)。兩個握桿之間的空間可容納小動物的籠子(如小鼠)。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電,可與觀察鏡luv-50A 或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP)。
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一類存在于腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白。GFP具有多種優(yōu)點:易于檢測,靈敏度高;熒光性質(zhì)穩(wěn)定,耐受性強;易于表達,無細胞毒性;可用于活細胞檢測。因此,GFP可作為報告基因用于檢測基因表達或調(diào)控,或作為融合標簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位、遷移、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用,或者靶向標記某些細胞器。
GFP吸收的光譜zui大峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發(fā)射光譜zui大峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對細胞的傷害更小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。此外,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下更穩(wěn)定。
類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。
觀察GFP熒光蛋白方法有:
1.便攜式GFP激發(fā)光源:
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡)是zui便捷、zui方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時,因為激發(fā)光為強烈的藍色光線,必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源。
上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果
2. 紫外光源:
采用紫外光源(又叫紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾,另外,標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。通過定點觀察GFP,可有利于學(xué)習如何操縱和提高有用的染色體特性,從而可以篩選出高基因表達的植物。
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應(yīng)用:
1、 野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。
2、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。
3、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體。
4、 用于基因表達的研究。
5、 用于Rhodamine(紅色熒光染料)、葉綠素、熒光素的研究。
以上部分內(nèi)容來自http://www.luyor.net/app/app202.html
GFP觀察常見問題:
1.動物植物里面表達GFP如何觀察和拍照?
首先要選擇光線比較暗的環(huán)境,佩戴路陽LUV-90P觀察眼罩,采用美國路陽熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410RB照射要觀察的植株,GFP表達位置即可清晰呈現(xiàn)。
2.觀察到的GFP表達位置如何拍照?
要拍照植物GFP表達的位置,首先要有一臺單反相機,安裝美國路陽LUV-520植物拍照濾鏡,美國路陽LUV-520濾鏡是62mm,如果您的單反相機鏡頭不是62mm,可在市場上購買濾鏡安裝轉(zhuǎn)換卡,也可直接找美國路陽中國服務(wù)中心免費索取,用LUYOR-3410RB熒光蛋白觀察鏡照射植物,用裝有LUV-520濾鏡的單反相機直接拍照就行了,切記要關(guān)閉照相機閃光功能。
3.紅色熒光蛋白如何觀察和拍照?
首先要選擇光線比較暗的環(huán)境,佩戴路陽LUV-50觀察眼罩,采用美國路陽便攜式熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410GR照射要觀察的植株,GFP表達位置即可清晰呈現(xiàn)。
熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?
4. 用LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡需要把植物葉片采下來觀察嗎?
LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡內(nèi)置有充電電池,即開即用,可以直接帶入到試驗田里面觀察, 無需采摘葉片,如果試驗田光線太亮,需要做隔光處理。
熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?
5. LUV-520拍照濾鏡可以用于其他廠家的激發(fā)光源嗎?
凡是能激發(fā)GFP熒光的熒光蛋白觀察鏡, LUV-520拍照濾鏡均能夠滿足,可以單獨購買LUV-520拍照濾鏡。
熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位?
6. 365nm、450nm、488nm 用哪個波段zui好?
GFP和egfp用這幾個波段都能激發(fā)出熒光,365nm激發(fā)的比較弱,488nm激發(fā)的熒光zui強,但488nm的激發(fā)波長太接近發(fā)射波長520nm,激發(fā)光和發(fā)射光距離太近對觀察眼鏡要求太高,觀察眼鏡很難把發(fā)射光隔離掉,會嚴重干擾發(fā)射的熒光。所以用450nm的激發(fā)光是zui理想的。
7. 365nm的紫外光源照射植物葉片為什么是紅色和黃色?
365nm的紫外光源照射植物葉片,葉片的葉綠素在紫外線作用下會發(fā)紅光,GFP發(fā)出的是綠色的熒光,紅色和綠色混在一起,會變成黃色,,用紫外光源照射葉片上黃色部位有可能就是GFP表達的位置。
8. 為什么觀察眼鏡和拍照濾鏡價格這么貴?
因為這種眼鏡和濾鏡的鏡片對波段的截止要求特別高,不允有任何激發(fā)光通過,鏡片表面經(jīng)過了60多層涂層處理,制造工藝特別復(fù)雜。
9. 觀察眼鏡和拍照濾鏡如何保養(yǎng)?
觀察眼鏡和拍照濾鏡的鏡片經(jīng)過了60多層涂層處理,不用時請放置好,表面有灰塵請用柔軟的鏡頭布蘸中性洗滌劑擦洗.
10. LUYOR-3415rg熒光蛋白觀察鏡主要有哪些應(yīng)用?
1.檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥等;
2.檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物:小鼠、兔子、猴子等;
3.檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物:細菌、真菌、酵母等;
4.檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達
11.在哪里可以買到美國路陽的便攜式熒光蛋白觀察鏡?
美國路陽在上海設(shè)立有中國客戶服務(wù)中心,提供路陽產(chǎn)品的銷售維修服務(wù)。上海、北京、鄭州均可免費上門演示,美國路陽對中國地區(qū)的客戶提供3年免費維修服務(wù),中國地區(qū)免費請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系:4006-254-365
如何選擇熒光蛋白激發(fā)波長(GFP,F(xiàn)ITC,RFP ......)?
LUYOR提供五種不同的熒光蛋白激發(fā)波長光源,配有經(jīng)濟型體視顯微鏡熒光適配器和便攜式雙熒光蛋白激發(fā)光源。這些可用于激發(fā)多種熒光團。此頁面提供有關(guān)為您的應(yīng)用選擇正確波長組的指導(dǎo)。
表 1列出了LUYOR波長組,包括激發(fā)范圍的zui強烈部分和成對發(fā)射濾光片的截止值。
表2 列出了我們推薦用于各種熒光蛋白和染料的波長組。如果您沒有在列表中看到您的熒光團,請告訴我們,我們將添加它。如果您發(fā)現(xiàn)任何錯誤或可以根據(jù)您的個人經(jīng)驗驗證效果,請同時告訴我們。
我們的建議基于熒光團的工作知識 - 我們自己或客戶的反饋 - 或已公布的光譜數(shù)據(jù)。
表一:熒光蛋白的波長組
指定 | 激發(fā) | 發(fā)射 | 適用于 |
UV - 紫外線 | 360 - 380nm | 415nm長波通 | Dapi |
VI - 紫羅蘭 | 400 - 415nm | 450nm長波通 | 藍色熒光蛋白 青色熒光蛋白 |
RB - 皇家藍 | 440-460nm | 500nm長波通 | 綠色熒光蛋白 |
RB - 皇家藍 | 440-460nm | 500 - 560nm帶通 | 綠色熒光蛋白 |
CY - 青色 | 490 - 515nm | 550nm長波通 | 黃色熒光蛋白 |
GR - 綠色 | 510 - 540nm | 600nm長波通 | 紅色熒光蛋白 |
熒光蛋白和熒光物質(zhì)的激發(fā)波長的選擇
Fluorescent Protein/Dye | UV(紫外線) | VI (紫色) | RB(藍色) | CY(青色) | GR(綠色) |
Alexa Fluor 488 | √ | ||||
Alexa Fluor 555 | √ | ||||
Alexa Fluor 568 | √ | ||||
Alexa Fluor 594 | √ | ||||
amCyan1 | √ | ||||
Aquamarine | √ | ||||
Calcein | √ | ||||
Cerulean | √ | ||||
CFP | √ | ||||
Citrine | √ | ||||
Clover | √ | ||||
Cy3 | √ | ||||
CyOFP1 | √ | ||||
CyPet | √ | ||||
DAPI | √ | ||||
DASPEI | √ | ||||
Dextran-FITC | √ | ||||
Dextran-Texas Red | √ | ||||
Dextran-TRITC | √ | ||||
DiI | √ | ||||
DsRed | 2 | 推薦 | |||
DsRed Dimer2 | √ | ||||
E2-Orange | √ | ||||
EBFP | √ | ||||
EBFP2 | √ | ||||
ECFP | √ | ||||
EGFP | √ | ||||
eqFP670 | √ | ||||
EYFP | √ | ||||
FAM (fluorescein) | √ | ||||
FITC | √ | ||||
Fluorescein | √ | ||||
FusionRed | X | ||||
Fluorescent Protein/Dye | UV | VI | RB | CY | GR |
GFP | √ | ||||
Hoechst | √ | ||||
iFP1.4 | 推薦 | 2 | |||
KO1 | √ | ||||
LSSmOrange | √ | ||||
Lucifer Yellow | √ | ||||
mAmetrine | √ | ||||
mApple | √ | ||||
mAzamiGreen | √ | ||||
mBanana |
我公司生產(chǎn)多款便攜式熒光蛋白激發(fā)光源,如希望提供更多詳細信息,可直接聯(lián)系上海路陽生物技術(shù)有限公司的銷售客服。.
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