sfGFP熒光蛋白的激發(fā)光和發(fā)射光

sfGFP是superfolder GFP的縮寫(xiě)，它是一種設(shè)計(jì)精良的折疊版本的GFP，對(duì)化學(xué)變性劑和極端溫度顯示更大的耐受力。Superfolder GFP是2005年發(fā)表的一種基本（構(gòu)成熒光）綠色熒光蛋白，來(lái)源于Aequorea victoria。據(jù)報(bào)道，它是一種非?？焖俪墒斓娜醵垠w。Superfolder GFP源自Folding Reporter GFP，具有以下突變：S30R/Y39N/N105T/Y145F/I171V/A206V

superfolder GFP的激發(fā)光和發(fā)射光：

sfGFP的激發(fā)光是·485nm，發(fā)射光為510nm

Superfolder GFP EX：485nm，Superfolder GFP EM：510nm

superfolder GFP的激發(fā)光和發(fā)射光的光譜圖

eGFP和GFP的區(qū)別：

GFP（綠色熒光蛋白）是一種在藍(lán)光或紫外光下發(fā)出綠色光的蛋白質(zhì)。它天然存在于水母維多利亞水母中。GFP由238個(gè)氨基酸組成。GFP 的大小為 26.9 kDa。GFP 是分子生物學(xué)中的強(qiáng)大工具，因?yàn)樗哂袃?nèi)在的熒光，沒(méi)有任何輔助分子。熒光是由于蛋白質(zhì)的連續(xù)氨基酸的共價(jià)重排。蛋白質(zhì)折疊后，主鏈原子 Ser65、Tyr66 和 Gly67 在 O 2存在下形成高度共軛的平面對(duì)羥基苯亞甲基咪唑啉酮發(fā)色團(tuán). 晶體結(jié)構(gòu)研究表明，發(fā)色團(tuán)填充在分子的 β-桶結(jié)構(gòu)的核心內(nèi)可防止其因順磁氧、水偶極子或順?lè)串悩?gòu)化而猝滅。此外，發(fā)色團(tuán)與相鄰分子的非共價(jià)相互作用增強(qiáng)了其光譜特性。

EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）是野生型 GFP 的變體，相對(duì)于 GFP 具有更高強(qiáng)度的發(fā)射。它是個(gè)也是重要的 GFP 變體之一。兩個(gè)突變 F64L 和 S65T 在 37 °C 下產(chǎn)生具有更高折疊效率的 EGFP。有趣的是，由于 S65T 對(duì) 395 nm 峰的抑制，EGFP 在 ~490 nm 處具有單個(gè)激發(fā)峰，因?yàn)樗{(diào)節(jié)附近 Glu222 的電離狀態(tài)。另一方面，F(xiàn)64L 提高了 37 °C 時(shí)的折疊效率。重要的是，EGFP 的密碼子序列針對(duì)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行了優(yōu)化。

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