如何觀察熒光微球的熒光?
檢驗熒光微球是否有熒光,可以用美國路陽LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源來測試,如果是綠色熒光微球,采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的藍色光源照射,佩戴LUV-30A熒光觀察眼鏡觀察。如果是紅色熒光微球,采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的綠色光源照射,佩戴LUV-50A熒光觀察眼鏡觀察。LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源內(nèi)置了12顆大功率led,照射面積大,激發(fā)熒光亮度高,觀察效果好,如果您是科研院所,想試用美國路陽的熒光激發(fā)光源,可以聯(lián)系上海峰志儀器有限公司申請樣機試用。
熒光微球的熒光激發(fā)效果:
上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果
上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果
何為熒光微球(Fluorescent microsphere)?
熒光微球: 熒光微球通常是指形狀為球形,直徑在幾納米至幾十微米之間,微球表面或內(nèi)部負載有熒光物質(zhì),在受到一定的能量激發(fā)時能夠發(fā)出熒光的微粒。與純熒光化合物相比,熒光微球具有相對穩(wěn)定的發(fā)光行為和形態(tài)結(jié)構(gòu)。目前,已經(jīng)有能夠制備各種各樣的粒徑從納米級到亞微米級的熒光微球。熒光微球有比較穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)及發(fā)光行為,受溶劑、熱、電、磁等外界條件的影響比純熒光化合物小很多。
綠色熒光微球是用于體外診斷、血流測定、成像,以及流式細胞儀校準的微球。綠色熒光微球填充了高性能的油溶性熒光染料,靈敏度高,穩(wěn)定性高。
熒光微球作為一種特殊的功能微球,由于在單個微球中富集了能夠發(fā)射熒光的有機或無機物質(zhì),除具有無機物和有機物的性能外,同時在外界能量刺激下還能發(fā)射熒光。熒光微球粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高,微球表面弧度有利于抗原決定簇和抗體結(jié)合位點的暴露面處于佳的反應(yīng)狀態(tài),因此在眾多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用,如生物化學(xué)、生物醫(yī)藥、臨床醫(yī)學(xué)、基因分析以及光學(xué)儀器等,其中熒光微球在醫(yī)藥、生物方面的應(yīng)用尤為重要。
通過在聚合物微球表面或內(nèi)部引入一種或多種熒光物質(zhì)制備的熒光微球,早被用作校準流式細胞儀和熒光顯微鏡的熒光標(biāo)準物質(zhì)微球,后逐漸被應(yīng)用到細胞標(biāo)記、生物分子標(biāo)記及在活性條件下的示蹤,也可固定蛋白質(zhì)分子等,并跟蹤其功能化過程。
熒光微球能夠攜帶許多熒光分子,較弱的刺激就可以引發(fā)較強的信號,所以只需要少量的低能輻射就能產(chǎn)生熒光信號,避免了使用傳統(tǒng)的放射性微球造成的輻射危險,并在不損失檢測靈敏度的前提下降低了成本。已經(jīng)產(chǎn)業(yè)化的熒光微球,使得高通量免疫分析、藥物篩選、固定化酶等領(lǐng)域的技術(shù)發(fā)展上了一個臺階,熒光微球作為診斷試劑應(yīng)用于免疫分析已是一個必然。熒光微球在生物樣品檢測中作為不同檢測對象的固定化載體,不同熒光微球?qū)?yīng)不同的捕獲抗體,識別不同的抗原,從而實現(xiàn)多種待測抗原定性及定量檢測。我們期待著這一技術(shù)走向成熟和發(fā)展。
熒光微球用于核酸檢測
利用不同顏色的上轉(zhuǎn)發(fā)光材料編碼的微球可用于結(jié)合不同的報告標(biāo)簽,當(dāng)結(jié)合上單鏈的DNA之后,熒光強度會顯示不同。利用類似的方法,將上轉(zhuǎn)發(fā)光的納米顆粒包裹在聚苯乙烯的微球內(nèi)部,調(diào)整上轉(zhuǎn)納米顆粒(不同發(fā)射波長)的比例,可以獲得不同的熒光編碼微球。上轉(zhuǎn)發(fā)光編碼微球與報告分子的染料標(biāo)記沒有光學(xué)交叉,因此標(biāo)記染料到熒光波長可選擇范圍很寬。量子點編碼的微球也可用于結(jié)合目標(biāo)DNA分子,利用微流控芯片的層流以及外部的磁力,報告分子、清洗劑通過磁力的作用產(chǎn)生了三股流體,利用量子點標(biāo)記的微球,進行雜交鏈式反應(yīng)之后的信號出現(xiàn)增強的現(xiàn)象,因此量子點編碼的微球可以用于在人的肺癌細胞中進行miRNA的過表達的多重檢測(圖2所示)。
熒光微球用于蛋白質(zhì)檢測
多重顏色的量子點結(jié)合的微球廣泛被證實能夠用于多重抗原的同時檢測,包括IgG,腫瘤標(biāo)志物,病原標(biāo)志物等,使用上轉(zhuǎn)換納米顆粒以及攜帶磁性納米納米顆粒標(biāo)記的微球可以同時檢測兩種不同的抗原?;谖⒘骺丶夹g(shù),利用AFP ( FEMMs 熒光編碼的磁珠) 對Fe3O4納米顆粒的磁性富集以及分離(高溫化學(xué)溶脹的方式),量子點以及Fe3O4納米顆粒與微球的通過高分子鏈端或者疏水作用進行有效的結(jié)合,該技術(shù)也廣泛的應(yīng)用于一些多重生物標(biāo)志物的檢測。
熒光微球用于細菌檢測
傳統(tǒng)的細菌檢測(例如微量肉湯稀釋法或者E-測試)所需時間周期長,因此需要開發(fā)能夠快速以及高效地對多重細菌進行檢測。Ozcan組利用了聚苯乙烯微球能夠快速對寄生于人角膜以及結(jié)膜的金黃色葡萄球菌進行快速的計數(shù)。Wang課題組將熒光微球與萬古激素(vancomycin)進行孵育,通過氫鍵與細菌細胞壁上的連接酶進行結(jié)合,通過熒光磁珠微球的擴散方式來有效識別溶液中活細菌或者死細菌。
基于POCT平臺的熒光微球的檢測
Im使用智能手機的方式分析免疫微球的衍射圖案,從而不同生化目標(biāo)的檢測,包括一些可溶解的蛋白、核酸以及細胞水平的蛋白。但是這個技術(shù)非常依賴于手機的攝像頭的分辨率,除此之外,該檢測方式也依賴于不同手機品牌,這些會極大的限制了該技術(shù)達到應(yīng)用以及推廣(如圖a所示)。Ming課題組為了分析微球的熒光信號,整合了一些光學(xué)元器件(例如激發(fā)光源、透鏡、光學(xué)濾片以及其他的電子元器件)開發(fā)了一套智能手機的檢測設(shè)備。標(biāo)記了不同顏色量子點的微球被捕獲在玻璃芯片的孔洞中,從而形成了微球陣列芯片用于快速檢測多重抗原物質(zhì)。該方案在文中被用于檢測七種抗原物質(zhì),利用上轉(zhuǎn)換納米顆粒結(jié)合微球的方式來快速檢測不同種類的霉菌毒素。
上海峰志儀器有限公司銷售的LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源能夠激發(fā)綠色熒光微球、紅色熒光微球的發(fā)出熒光。